中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服熱線:400-0532-596
微生物技術資料
文章檢索
  首頁 > 微生物知識->微生物檢測方法和標準->釀酒酵母菌檢驗標準操作程序

釀酒酵母菌檢驗標準操作程序



錄入時間:2021-5-20 10:07:18 來源:青島海博生物

標準依據:《GB/T 34224-2017 生物產品中功能性微生物檢測》


1 設備和材料


除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下。

1.1 恒溫培養箱:28℃士1℃。

1.2 冰箱:2℃~5℃。

1.3 天平:感量為0.1g。

1.4 均質器及無菌均質袋,均質杯。

1.5 振蕩器。

1.6 無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度),10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。

1.7 無菌錐形瓶:容量250mL、500mL。

1.8 無菌培養皿:直徑90mm。

1.9 顯微鏡:10倍一100倍。

1.10 pH計或pH比色管或精密pH試紙。


2 培養基和試劑


2.1 孟加拉紅瓊脂培養基。

2.2 麥芽汁液體培養基。

2.3 無菌生理鹽水。

2.4 酵母菌生化鑒定試劑盒。


3 檢驗程序


釀酒酵母菌的檢驗程序見下圖。


4 操作步驟


4.1 樣品制備

4.1.1 固體和半固體樣品

稱取25g樣品,置于225mL生理鹽水的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打lmin~2min制成1:10的樣品勻液;或置于盛有225mL滅菌生理鹽水的無菌均質杯中,8000r/min~10000r/min均質lmin~2min制成1:10的樣品勻液。

4.1.2 液體樣品

應先將其充分搖勻后,以無菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中,充分振搖﹐制成1:10的樣品勻液。


4.2 樣品稀釋

4.2.1 用1mL無菌吸管或微量移液器吸取l:10樣品勻液lmL,沿管壁緩慢注于裝有9 mL生理鹽水的無菌試管中(注意吸管尖端不要觸及稀釋液),振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻,制成l:100的樣品勻液。

4.2.2 另取1mL無菌吸管或微量移液器吸頭,按上述操作順序,做10倍遞增樣品勻液,每遞增稀釋一次,即換用1次lml滅菌吸管或吸頭。


4.3 培養

根據對待檢樣品菌含量的估計,選擇2個~3個連續的適宜稀釋度﹐每個稀釋度吸取樣品勻液0.2mL接種于孟加拉紅瓊脂平板內,使用涂布棒盡可能小心快速地涂布接種液于瓊脂表面,涂布棒不得接觸平皿邊緣。每個稀釋度接種2個平板。涂布后,將平板靜置10 min使接種物完全被培養基吸收。翻轉平皿置于28℃±1℃厭氧培養箱中培養72h±2h。


4.4 菌落計數

4.4.1 選取特征菌落數在10CFU~150CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于10 CFU的平板記錄具體菌落數,大于150 CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。

4.4.2 其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數。


4.5 鑒定

4.5.1 菌落挑選和純培養

挑選平板上5個菌落大、紅色、平滑、邊緣齊整的菌落分別轉入麥芽汁液體培養基中,28℃±1℃恒溫培養箱內增菌培養24h-48h后進行形態學、生化鑒定。

4.5.2 形態學鑒定

鏡檢。釀酒酵母呈卵圓形或圓形,直徑5.0um×10.0um,單個、成雙或成簇排列,多邊芽殖。

4.5.3 生化鑒定

使用酵母菌生化鑒定試劑盒進行生化鑒定。鑒別特征參見表B.8。



5 結果計算


5.1每個平板中釀酒酵母菌的數量

每個平板中釀酒酵母菌菌落數的計算見式(1):

  a=b/A×C                 ...............(1)

  式中

  a-每塊平板上的釀酒酵母菌菌落數;

  b-挑取后經證實為釀酒酵母菌的菌落數;

  A-挑取平板上用于驗證的菌落數;

  C-平板上的所有特征菌落數。


5.2 菌落總數的計算方法

5.2.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內,計算兩個平板中釀酒酵母菌菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每克(毫升)中菌落總數結果。

5.2.2 若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時,按式(2)計算:

  N=∑C/(n1+0.1n2)×d        ...............(2)

  式中:

  N-樣品中菌落數;

  ∑C-平板(含適宜范圍菌落數的平板)菌落數之和;

  n1-第一稀釋度(低稀釋倍數)平板個數;

  n2-第二稀釋度(高稀釋倍數)平板個數;

  d-稀釋因子(第一稀釋度)。


6 報告


6.1 結果判定

若樣品菌落符合釀酒酵母菌形態學及生化鑒定的特征,可判定為釀酒酵母菌。


6.2 結果報告

6.2.1 定性報告

在25g(mL)樣品中檢出或未檢出釀酒酵母菌。

6.2.2 定量報告

菌落數小于100 CFU時,以整數報告。菌落數大于或等于100 CFU時,對第3位數字進行修約后,取前2位數字,后面用0代替位數;也可用10的指數形式來表示,采用兩位有效數字。



  本文節選自《GB/T 34224-2017 生物產品中功能性微生物檢測》。

附:

GB/T 34224-2017 生物產品中功能性微生物檢測 點擊下載

GB/T 34224-2017 生物產品中功能性微生物檢測標準用到的培養基 點擊下載


 

上一篇:產朊假絲酵母菌檢驗標準操作程序

下一篇:微生物檢驗方法總則-化妝品安全技術規范(2022年版)

相關文章:
首頁 | 關于我們 | 網上商城 | 在線客服 | 聯系我們
地址:青島市城陽區錦匯路1號A2棟
電話:400-0532-596 0532-66087773
   66087762、81935169
傳真:0532-81935080
郵箱:qdhbywg@vip.126.com
廣東辦事處
羅經理、溫小姐
電話:020-87204426 13711177972
郵箱:LWN7972@126.com
產品技術咨詢
工作日(周一至周六8:00-18:00):
18562658263 13176865511
其它時段:13105190021
投訴與建議
13105190021 13006536294
亚洲国产香蕉碰碰人人|午夜爽爽爽男女免费观看|亚洲 精品 综合 精品 自拍|肉h视频夜观欧美|另类亚洲综合区图片小说